የ polyacrylamide gel electrophoresis ጥንቃቄዎች

· ፖሊacrylamideጄል የግድ በ acrylamide monomer፣ ፖሊሜራይዜሽን ማስጀመሪያ ቁሳቁስ፣ ማነቃቂያ፣ እና የጨው እና ቋት ድብልቅ መብት በአንድ ላይ።

· acrylamideእና BIS (N, N '- methylene double acrylamide) የሞኖመር ቅርጽ ጄል ማትሪክስ ነው.

አሚዮኒየም ፐርሰልፌት የማጣበቂያ ፖሊሜራይዜሽን ሂደት ይጀምራል። የማጣበቂያው አሠራር በውሃ ውስጥ የተዘጋጀ 10% የአሞኒየም ፐርሰልፌት መፍትሄ ያስፈልገዋል. አብዛኛው መረጃ የነቃ አጠቃቀምን አስፈላጊነት ያመለክታል። ነገር ግን፣ 10% መፍትሄው በ4℃ ላይ ለብዙ ሳምንታት ከፍተኛ እንቅስቃሴ ሳይቀንስ ሊቀመጥ ይችላል። እስከ 10 ሚሊ ሜትር ድረስ ያዘጋጁ እና ሙጫው መቀላቀል ሲያቅተው ያስወግዱት.

ጠቃሚ ምክር፡ የacrylamideበቅደም ተከተል ሙጫ እና ፕሮቲን ሙጫ አንድ አይነት አይደለም. ቀድሞ የተሰራ acrylamide: BIS መፍትሄ የሚጠቀሙ ከሆነ ትክክለኛውን ጠርሙስ ማግኘትዎን ያረጋግጡ።

ቴሜድ (N, N, N', N'- tetramethyl ethylenediamine) ቀዝቃዛ በሆነ ቡናማ ጠርሙስ ውስጥ, በማቀዝቀዣ ውስጥ የተቀመጠ ማበረታቻ ነው. ሙጫ ከማፍሰስዎ በፊት ይጨምሩ።

· ፖሊacrylamide electrophoresis በኤሌክትሮፊዮሬሲስ ውስጥ ጥቅም ላይ የዋለ ብርጭቆ ከእያንዳንዱ ጊዜ በፊት እና በኋላ መታጠብ አለበት. ከኤሌክትሮፊዮሬሲስ በኋላ ለስላሳ ብሩሽ እና ጨርቅ በሙቅ ውሃ ውስጥ በሳሙና መታጠብ, በተጣራ ውሃ ማጠብ እና እንዲደርቅ ይቁሙ.

· እርጥበት እና አቧራ በፖለሜር ፖሊመር ሊፈጠር ይችላል. ከኤሌክትሮፊዮሬሲስ በፊት, የመስታወት ቆርቆሮውን በመስታወት ማጽጃ ያጽዱ እና ለስላሳ ብሩሽ ይጥረጉ. በተጣራ ውሃ ይታጠቡ እና በደንብ ከወረቀት ጋር ያድርቁ. ከወረቀት በፊት በ 70% ኢታኖል ማጠብ ለማጽዳት እና መድረቅን ለማፋጠን ይረዳል. የ acrylamide ናሙናዎችን በተከታታይ ይጨምሩ፡- BIS፣ ውሃ፣ ቋት መፍትሄ፣ ammonium persulfate፣ TEMED። በደንብ ይንቀጠቀጡ እና ወዲያውኑ ያፈስሱ.

ከፖሊሜራይዜሽን በፊት ፖሊacrylamideን ማፍለጥ አስፈላጊ አይደለም. (አክሪላሚድ አረፋዎችን ለማስወገድ በቫኪዩም ውስጥ ይቀመጥ ነበር ምክንያቱም ኦክስጅን ፖሊሜራይዜሽን ስለሚከለክለው።)

አግድም ሙጫ ነጥብ ናሙና ምክሮች.

· አንድ ጥቁር ወረቀት ከታች ባለው ሳጥን ውስጥ፣ ጥቁር ዳራ በይበልጥ በግልፅ ለማየት የተወሰነ የናሙና ቀዳዳ ያድርጉ።
· ሙጫ ታንክ የተሞላ ቋት፣ ልክ ከኮሎይድ በላይ።
· ጠርዙ መብራት ካለው, መብራቶቹን ያብሩ, ብርሃን ኮሎይድ ያበራል. ናሙናውን በ pipette ውስጥ ይሳሉ.
· አውቶማቲክ የቧንቧ ማቀፊያ መሳሪያ በመጠቀም.
· በ 10-200 mu 1 ፈሳሽ የሚንቀሳቀስ ነጥብ በአብዛኛዎቹ ናሙናዎች ላይ ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል. በጣም ትንሽ ለሆኑ የናሙና ቀዳዳዎች (ከ 10μ1 ያነሰ), ሙጫ ለመቅዳት ጥቅም ላይ የሚውለው ረዥም የፓይፕ ጭንቅላት የበለጠ ምቹ ነው.

· በናሙናው ውስጥ የተጠመቀ የቧንቧ መስመር ፣ ቀስ በቀስ የሚንቀሳቀስ ፈሳሽ ወደ ውስጥ መተንፈስ። ናሙናው ከግሊሰሪን ጋር ተጣብቆ ሊታይ ይችላል, እና ፈጣን ፓምፕ የአየር አረፋዎችን ወደ ፒፔት ጭንቅላት ሊስብ ይችላል.

· ናሙናዎች የፓይፕቲንግ ጭንቅላትን ከተነፈሱ በኋላ በቧንቧው ጠርዝ ላይ ያለውን ፈሳሽ ጭንቅላት በቀስታ ይንቀሳቀሳሉ ወይም ከወረቀት ጠብታዎች ውጭ ፈሳሽ ጭንቅላትን ይጠባል። ናሙናውን እንዳትጠባ ተጠንቀቅ.

ናሙናውን ወደ ናሙና ጉድጓድ ውስጥ ያስቀምጡት

· የቧንቧ ማቀፊያ መሳሪያ ትንሽ ግፊትን ለመጠበቅ, ናሙናዎቹ በትንሹ የተትረፈረፈ ፈሳሽ ጭንቅላት እንዲንቀሳቀሱ ያድርጉ.
· ወደ ቋት ውስጥ የገባው የፓይፕቲንግ ጭንቅላት፣ ከቦታው ጉድጓዶች ትንሽ ከፍ ያለ፣ አወንታዊ ግፊትን ይጠብቃል። የ pipette ጫፍ በትንሽ ጉድጓድ ውስጥ ሊገባ ይችላል.
· ናሙናዎቹ በቀስታ እና በተረጋጋ ሁኔታ ይወጣሉ። የ pipette ጫፍ ከነጥብ ናሙና ጉድጓድ በላይ ይደረጋል, እና ናሙናው ወደ ጉድጓዱ ውስጥ ይሰምጣል. ወደ ውስጥ ከመግፋት ይልቅ የናሙናውን ቀዳዳ ለመሙላት ናሙናው እንዲሰምጥ ያድርጉ።
የመጨረሻው የናሙና ጠብታ በፈሳሽ ጭንቅላት አንድ ጊዜ ፈሳሹ ወደ ሁለተኛው እግር ይንቀሳቀሳል፣ ፈሳሹን ቀስ በቀስ ያነሳል፣ ከጠባቂው ውስጥ ይወጣል።

ቀጥ ያለ ሙጫ ናሙና እንዴት እንደሚሰራ?

· ቀጥ ያለ ሙጫ ነጥብ ናሙና ቀዳዳዎች በሁለት ብርጭቆዎች መካከል ተፈጥረዋል ። በጣም በቀጭኑ ሙጫ ውስጥ, የ pipette ጭንቅላት በሁለት ብርጭቆዎች መካከል እንኳን ሊገባ አይችልም. ግሊሰሪንን ይመልከቱ! የ pipette ጭንቅላትን በናሙናው ቀዳዳ ላይ ያድርጉት እና ናሙናው ወደ ጉድጓዱ ውስጥ ይሰምጣል.
· ነጥብ ናሙና በፊት, polypropylene አሲል ጄል ናሙና ቀዳዳ ንጹሕ ያለቅልቁ ነው ቋሚ ነጥብ ማስቀመጥ እርግጠኛ ይሁኑ. ከናሙና ጉድጓዱ በታች ሊታዩ የሚችሉትን ፖሊመሜራይዝድ አሲሪላሚድ እና ውሃ ያጠቡ። ውሃው የናሙናውን ቀዳዳ በእጅጉ ሊያሳንስ ይችላል. 25ml ወይም 50ml ሲሪንጅ እና ባለ 18-መለኪያ መርፌ ይጠቀሙ። በኤሌክትሮፊዮሬሲስ ቋት ውስጥ አፍስሱ እና የናሙናውን ቀዳዳ በጥንቃቄ ያጥቡት።
· የናሙናውን ቀዳዳ ለማየት አስቸጋሪ ሊሆን ይችላል, ግን በተመሳሳይ, ቀሪው ቀላል ነው. ከመጠን በላይ ቀዳዳዎች ካሉ, የናሙና ቋት በ bromophenol ሰማያዊ ሊሞከር ይችላል.